knight
۱۳۹۱-۱۲-۰۷, 21:16
به کمک میکروسکوپ نوری می توان باکتری ها را از لحاظ شکل، اندازه، طرز قرار گرفتن، رنگ آمیزی و حرکت مورد مطالعه قرار داد.
آزمایش میکوسکوپی به 2 طریق انجام می گیرد:
الف) Wet mount :
در این روش اگر برداشت از مواد مایع باشد با یک پی پت پاستور یا لوپ استریل یک قطره از محیط کشت مایع یا مایعات بدست آمده از بیمار برداشت کرده، روی لام قرار داده، بوسیله لامل روی آنرا پوشانده و با میکروسکوپ مشاهده می کنیم.
اما اگر برداشت از محیط جامد باشد یک قطره سرم فیزیولوژی (نرمال سیلین) استریل روی لام قرار داده، کمی از کلنی را بوسیله نیدل یا آنس برداشته و در سرم فیزیولوژی حل کرده تا سوسپانسیون یکنواختی بدست آید، بوسیله لامل سوسپانسیون را پوشانیده و با عدسی 40 (بدون روغن ایمرسیون) باکتریها را مشاهده می کنیم. در این روش خصوصیات باکتریها کاملا مشخص نیست، اما حرکت آنها را می توان بررسی کرد.
نکته ای که باید به آن توجه کرد این است که اگر اسلاید سرد شود یا خشک شود حرکت باکتریها از دست می رود. در ضمن باید توجه کرد که حرکت براونی مایع با حرکت باکتری اشتباه نشود.
ب) آزمایش میکروسکوپی پس از رنگ آمیزی:
به علت اینکه باکتریها شفاف هستند و زیر میکروسکوپ بدون رنگ آمیزی بخوبی قابل رؤیت نیستند، لذا برای شناسایی، مشاهده شکل (morphology)، و دیدن قسمت های مختلف آنها، باید رنگ آمیزی شوند.
اول یه توضیح کوچولو در مورد رنگها:
به رنگهایی که پس از یونیزه شدن دارای بار الکتریکی منفی باشند، اسیدی گویند که با مواد بازی سلولها ترکیب می شوند (مانند ائوزین). به رنگهایی که پس از یونیزه شدن دارای بار الکتریکی مثبت باشند، بازی گویند که با مواد اسیدی سلولها ترکیب می شوند (مانند متیلن بلو). چون در هسته باکتریها مقدار زیادی اسید نوکلئیک وجود دارد که دارای بار الکتریکی منفی هستند. باکتریها میل ترکیبی زیادی با رنگهای بازی دارند. جهت رنگ کردن سیتوپلاسم و زمینه گسترش، رنگهای اسیدی مناسب می باشند.
بطور کلی دو نوع رنگ آمیزی در آزمایشگاه میکروب شناسی به کار می رود.
1)رنگ آمیزی ساده: مثل متیلن بلو و مرکب هند و چین
2)رنگ آمیزی مرکب: مثل Gram stain، Spore stain، Flagella stain، Albert stain
شیوه های رنگ آمیزی زیاد و مختلفی برای اهدافمان وجود دارد: (که چند تاییشو این جا نام می برم و یه توضیحی در موردش خدمتتون عرض می کنم)
1) رنگ آمیزی گرم (که دوست خوبمون کامل و عالی توضیح دادن)
2) رنگ آمیزی اسید فست (Acid fast)
3) رنگ آمیزی اسپور به روش shaeffer & fulton
4) رنگ آمیزی کپسول (که باز هم دوست خوبمون زحمت کشیدن و خیلی کامل در موردش نوشتن)
5) رنگ آمیزی متیلن بلو
6) رنگ آمیزی فلاژل
7) رنگ آمیزی آلبرت
برای شروع همه رنگ آمیزی ها ما نیاز به اسمیر یا گستره داریم که دوستمون زحمتشو کشیدن و توضیح دادن.
رنگ آمیزی Acid fast:
دیواره سلولی بعضی از انگل ها و باکتریهایی که دارای زنجیره طویل اتم های کربن (50-90 کربنه) و اسیدهای چرب (مایکولیک اسید) هستند، زمانی که با یک رنگ بازی مانند فوشین رنگ می شوند نسبت به رنگ بری با اسید الکل مقاومت نشان میدهند. مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و سایر مایکوباکتریوم ها و کوکسیدیاها مثل گونه های کریپتوسپوریدیوم، نوکاردیاها و کورینه باکتریوم ها نیز تا حدودی اسید فست رنگ می گیرند. رنگ آمیزی کلاسیک اسید فست به زیل-نلسون (Ziehl-Neelson) معروف می باشد. در این رنگ آمیزی برای بهتر رنگ گرفتن دیواره سلولی، باید از حرارت استفاده کرد. رنگ آمیزی اسید فست سرد که روش تغییر یافته اسید فست می باشد، بنام Kinyoun خوانده می شود.
این روش رنگ آمیزی (Kinyoun) بدون حرارت انجام شده و طی آن رنگ بری توسط محلول آبی اسید سولفوریک 1% (اسید سولفوریک حل شده در آب) صورت می گیرد. هنگامی که اسلاید رنگ شده را به روش زیل نلسون با بزرگنمایی 100 مطالعه می کنیم، ارگانیسم های اسید فست مثبت به رنگ قرمز دیده می شوند. رنگ زمینه اگر از متیلن بلو استفاده شود به رنگ آبی و اگر از مالاشیت گرین استفاده شود به رنگ سبز دیده میشود.
روش رنگ آمیزی زیل-نلسون:
سطح گسترش فیکس شده را با مقداری کربول فوشین فیلتر شده می پوشانیم و لام را تا زمانی که از آن بخار خارج شود، به مدت 5 دقیقه حرارت ملایم می دهیم. رنگ نباید بر سطح اسلاید خشک شود. اگر رنگ تبخیر شد، تمام سطح اسلاید را دوباره با مقداری کربول فوشین می پوشانیم. پس از شستشوی لام با آب، برای مدت 10 الی 20 ثانیه با اسید الکل سطح اسلاید را عاری از رنگ می کنیم. بعد از شست شو، زمینه اسلاید را با متیلن بلو یا مالاشیت گرین به مدت 30 تا 45 ثانیه می پوشانیم. سپس لام را شسته و در زیر میکروسکوپ با عدسی 100 مطالعه می کنیم.
اگر خدا عمری بده در پست های بعدی، رنگ آمیزی های دیگه که اسم بردمو توضیح میدم.
اگر اشکالی در پست بنده وجود داشت، به بزرگی خودتون ببخشید.
منتظر پیشنهادات و انتقادات سازنده هستم. سؤالی هم بود تا جایی که سوادم قد بده، درخدمتم.
ارادتمند شما
آرش
آزمایش میکوسکوپی به 2 طریق انجام می گیرد:
الف) Wet mount :
در این روش اگر برداشت از مواد مایع باشد با یک پی پت پاستور یا لوپ استریل یک قطره از محیط کشت مایع یا مایعات بدست آمده از بیمار برداشت کرده، روی لام قرار داده، بوسیله لامل روی آنرا پوشانده و با میکروسکوپ مشاهده می کنیم.
اما اگر برداشت از محیط جامد باشد یک قطره سرم فیزیولوژی (نرمال سیلین) استریل روی لام قرار داده، کمی از کلنی را بوسیله نیدل یا آنس برداشته و در سرم فیزیولوژی حل کرده تا سوسپانسیون یکنواختی بدست آید، بوسیله لامل سوسپانسیون را پوشانیده و با عدسی 40 (بدون روغن ایمرسیون) باکتریها را مشاهده می کنیم. در این روش خصوصیات باکتریها کاملا مشخص نیست، اما حرکت آنها را می توان بررسی کرد.
نکته ای که باید به آن توجه کرد این است که اگر اسلاید سرد شود یا خشک شود حرکت باکتریها از دست می رود. در ضمن باید توجه کرد که حرکت براونی مایع با حرکت باکتری اشتباه نشود.
ب) آزمایش میکروسکوپی پس از رنگ آمیزی:
به علت اینکه باکتریها شفاف هستند و زیر میکروسکوپ بدون رنگ آمیزی بخوبی قابل رؤیت نیستند، لذا برای شناسایی، مشاهده شکل (morphology)، و دیدن قسمت های مختلف آنها، باید رنگ آمیزی شوند.
اول یه توضیح کوچولو در مورد رنگها:
به رنگهایی که پس از یونیزه شدن دارای بار الکتریکی منفی باشند، اسیدی گویند که با مواد بازی سلولها ترکیب می شوند (مانند ائوزین). به رنگهایی که پس از یونیزه شدن دارای بار الکتریکی مثبت باشند، بازی گویند که با مواد اسیدی سلولها ترکیب می شوند (مانند متیلن بلو). چون در هسته باکتریها مقدار زیادی اسید نوکلئیک وجود دارد که دارای بار الکتریکی منفی هستند. باکتریها میل ترکیبی زیادی با رنگهای بازی دارند. جهت رنگ کردن سیتوپلاسم و زمینه گسترش، رنگهای اسیدی مناسب می باشند.
بطور کلی دو نوع رنگ آمیزی در آزمایشگاه میکروب شناسی به کار می رود.
1)رنگ آمیزی ساده: مثل متیلن بلو و مرکب هند و چین
2)رنگ آمیزی مرکب: مثل Gram stain، Spore stain، Flagella stain، Albert stain
شیوه های رنگ آمیزی زیاد و مختلفی برای اهدافمان وجود دارد: (که چند تاییشو این جا نام می برم و یه توضیحی در موردش خدمتتون عرض می کنم)
1) رنگ آمیزی گرم (که دوست خوبمون کامل و عالی توضیح دادن)
2) رنگ آمیزی اسید فست (Acid fast)
3) رنگ آمیزی اسپور به روش shaeffer & fulton
4) رنگ آمیزی کپسول (که باز هم دوست خوبمون زحمت کشیدن و خیلی کامل در موردش نوشتن)
5) رنگ آمیزی متیلن بلو
6) رنگ آمیزی فلاژل
7) رنگ آمیزی آلبرت
برای شروع همه رنگ آمیزی ها ما نیاز به اسمیر یا گستره داریم که دوستمون زحمتشو کشیدن و توضیح دادن.
رنگ آمیزی Acid fast:
دیواره سلولی بعضی از انگل ها و باکتریهایی که دارای زنجیره طویل اتم های کربن (50-90 کربنه) و اسیدهای چرب (مایکولیک اسید) هستند، زمانی که با یک رنگ بازی مانند فوشین رنگ می شوند نسبت به رنگ بری با اسید الکل مقاومت نشان میدهند. مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و سایر مایکوباکتریوم ها و کوکسیدیاها مثل گونه های کریپتوسپوریدیوم، نوکاردیاها و کورینه باکتریوم ها نیز تا حدودی اسید فست رنگ می گیرند. رنگ آمیزی کلاسیک اسید فست به زیل-نلسون (Ziehl-Neelson) معروف می باشد. در این رنگ آمیزی برای بهتر رنگ گرفتن دیواره سلولی، باید از حرارت استفاده کرد. رنگ آمیزی اسید فست سرد که روش تغییر یافته اسید فست می باشد، بنام Kinyoun خوانده می شود.
این روش رنگ آمیزی (Kinyoun) بدون حرارت انجام شده و طی آن رنگ بری توسط محلول آبی اسید سولفوریک 1% (اسید سولفوریک حل شده در آب) صورت می گیرد. هنگامی که اسلاید رنگ شده را به روش زیل نلسون با بزرگنمایی 100 مطالعه می کنیم، ارگانیسم های اسید فست مثبت به رنگ قرمز دیده می شوند. رنگ زمینه اگر از متیلن بلو استفاده شود به رنگ آبی و اگر از مالاشیت گرین استفاده شود به رنگ سبز دیده میشود.
روش رنگ آمیزی زیل-نلسون:
سطح گسترش فیکس شده را با مقداری کربول فوشین فیلتر شده می پوشانیم و لام را تا زمانی که از آن بخار خارج شود، به مدت 5 دقیقه حرارت ملایم می دهیم. رنگ نباید بر سطح اسلاید خشک شود. اگر رنگ تبخیر شد، تمام سطح اسلاید را دوباره با مقداری کربول فوشین می پوشانیم. پس از شستشوی لام با آب، برای مدت 10 الی 20 ثانیه با اسید الکل سطح اسلاید را عاری از رنگ می کنیم. بعد از شست شو، زمینه اسلاید را با متیلن بلو یا مالاشیت گرین به مدت 30 تا 45 ثانیه می پوشانیم. سپس لام را شسته و در زیر میکروسکوپ با عدسی 100 مطالعه می کنیم.
اگر خدا عمری بده در پست های بعدی، رنگ آمیزی های دیگه که اسم بردمو توضیح میدم.
اگر اشکالی در پست بنده وجود داشت، به بزرگی خودتون ببخشید.
منتظر پیشنهادات و انتقادات سازنده هستم. سؤالی هم بود تا جایی که سوادم قد بده، درخدمتم.
ارادتمند شما
آرش